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产品名称:用于肽类和蛋白质的ACE色谱柱

产品型号:

产品报价:

产品特点:用于肽类和蛋白质的ACE 300Å色谱柱

用于肽类和蛋白质的ACE色谱柱的详细资料:

用于肽类和蛋白质的ACE 300Å色谱柱

  • 300Å超高纯硅胶基质
  • C18、C8、C4、CN和苯基
  • 3μm、5μm和10μm粒径
  • 高重现性
  • 非常稳定

优异的峰形和可重现性已将ACE HPLC色谱柱确立为蕞优质产品。
该品质也可被蛋白化学家所利用,以期在肽类、蛋白质和其他高分子量生物分子的分离中实现蕞佳性能和可重复性。

ACE300Å色谱柱具有多种多样的规格和粒径,可用于微细的分离、LC/MS分析和高速制备型分析(达工艺规模)。

 

色谱分析优选惰性固定相用于离子化化合物的反相HPLC,因为它们可以最大限度地降低硅醇基对分离的不利影响。

当分离含有极性官能团的化合物(特别是胺类)时,这可以改善峰形和可重现性。

具有极低硅醇活性的新一代超惰性固定相使其在分离这些类型的化合物时可以获得更佳的峰形和可重现性。

致力于小分子研究的科学家迅速采用了这种新技术,大孔(300Å)超惰性相可以使欲通过反相HPLC分离肽类和蛋白质的科学家们获益。

 

超惰性固定相对生物分子反相HPLC的益处
提高灵敏度
将TFA(三fo乙酸)用作肽类和蛋白质反相分离的流动相添加剂。
该添加剂通常被用于改善肽类和蛋白质复杂混合物的峰形和分离度。

如下图所示,在流动相中使用0.1%TFA可以使填充有活性固定相的色谱柱产生与由超惰性固定相制备的新一代色谱柱相当的峰宽。

然而,随着TFA浓度降低至0.01%以及最终的0.005%,超惰性相上的峰宽保持不变,但活性固定相上的峰宽会发生变形。
使用极低水平TFA分析肽类和蛋白质的能力有利于采用质谱法进行高灵敏度检测。

TFA可与多肽形成复合物合并增强选择性。然而,该相同的复合作用会降低质谱仪的灵敏度。

 

用于肽类和蛋白质分析的ACE 300Å色谱柱

蛋白质
条件
色谱柱:ACE 5 C18-300, 250 x 4.6mm
流速:1.0ml/min
温度:环境
流动相:A. 0.1% TFA(溶于水中) B. 0.1% TFA(溶于乙腈中),30分钟内 5%-70% B
检测:UV, 280nm

化合物
1. 核糖核酸酶A
2. 细胞色素C
3. 全铁转铁蛋白
4. 脱辅基肌红蛋白

 

肽类

条件
色谱柱:ACE 5 C18-300, 250 x 4.6mm
流速:1.0ml/min
温度:环境
流动相:A. 0.1% TFA(溶于水中)B. 0.1% TFA(溶于乙腈中),25分钟内10%-40% B
检测:UV, 220nm

化合物
1. 甘氨酸-酪氨酸
2. 催产素
3. 血管紧张素II
4. 神经降压素

 

灵敏度和峰形,随TFA的浓度而变化

色谱柱:250 x 4.6mm, 5μm C18 300Å
流动相:A:TFA(溶于水中) B: 溶于乙腈中的TFA(按照上述说明为%TFA),37.5分钟内10%-55%B。
流速:1.5mL/min
检测:UV 200nm

化合物
1. 甘氨酸-酪氨酸
2. 催产素
3. 血管紧张素II
4. 神经降压素

ACE 5 C18-300超惰性硅胶

Vydac 218TP低纯度“活性”硅胶

随着TFA浓度的降低,低纯度硅胶色谱柱(右图)显示性能急剧下降。
由超惰性硅胶制成的色谱柱(如ACE)会在TFA浓度降低时保持性能。

备注:比较性分离物不代表所有应用。

 

优化选择性
TFA和其他流动相添加剂与肽类和蛋白质的复合能力可用于调节选择性并改善分离度。如下图所示,将TFA浓度从0.1%降低至0.01%可使血管紧张素II和III实现分离。

在超惰性ACE色谱柱的情况下,随着分离度的显著改善,峰形和灵敏度保持恒定。在Vydac色谱柱(填充有更具活性的固定相)的情况下,峰形被严重破坏。

 

选择性,随TFA的浓度而变化

色谱柱:250 x 4.6mm, 5μm C18 300Å
流动相:A:TFA(溶于水中)B: 80%TFA(溶于乙腈中),20%TFA(溶于水中),(按照上述说明为%TFA),15分钟内25%-40%B
流速:1.0 mL/min

检测:UV 215nm
化合物:

1.血管紧张素II
2.血管紧张素III
3.血管紧张素I

ACE 5 C18-300
超惰性硅胶

Vydac 218TP
低纯度“活性”硅胶


通过降低TFA浓度来改善分离度。由低品质硅胶制成的色谱柱显示其性能降低。

备注:比较性分离物不代表所有应用。

 

增加PH范围
大多数生物分子是带电荷的。

肽类和蛋白质带有多种电荷。从小分子的经验来看,已流动相pH可以成为改变保留值并因此而优化带电化合物分离度的有力工具。

肽类也是如此。

再次以使用血管紧张素II和III作为实例,下图显示在pH=2的条件下,ACE超惰性色谱柱或填充有更具活性固定相的色谱柱上这两种肽未实现分离。

通过将pH增加至7,这两种色谱柱则均能提供良好的分离度。

然而,尽管ACE超惰性色谱柱保持了良好的峰形,但填充低纯度硅胶的色谱柱显示其峰形较差和性能损失。

在极性化合物的许多反相应用中观察到了这种现象。

在中等pH值时,硅醇相互作用更为普遍,因此峰拖尾在活性固定相上变得更加明显。

 

流动相pH对分离度的影响

色谱柱:250 x 4.6mm, 5μm C18 300Å
流动相:

pH 2 A:0.1% TFA(溶于水中) B: 0.1% TFA(溶于乙腈中)
pH 7 A: 10mM NH4OAc(溶于水中) B: 乙腈 15分钟内25%-40% B
流速:1.0 mL/min

检测:UV 215nm
化合物:

1.血管紧张素II
2.血管紧张素III
3.血管紧张素I

ACE 5 C18-300
超惰性硅胶

Vydac 218TP
低纯度“活性”硅胶

调节流动相的pH是提高选择性的有力工具。只有基于超纯硅胶的色谱柱才能在更高的pH值下保持性能。

备注:比较性分离物不代表所有应用。

 

ACE®是Advanced Chromatography Technologies Limited的注册商标。
ACE ExcelTM和HSCTM是Advanced Chromatography Technologies Limited的商标。
Advanced Chromatography Technologies Limited承认Advanced Scientific Instruments、Agilent Technologies Inc.、Alltech AssociatesInc.、GL Sciences Inc.、Idex Health&Science LLC、Phenomenex Inc.、Shimadzu Corporation、Thermo Fisher Scientific和Waters Corporation的注册和未注册商标,且与上述这些公司没有任何隶属关系。

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